Desenvolvimento de organogel injetável subcutâneo de Pluronic®-F127 e lecitina de soja (OPL) contendo meloxicam para uso veterinário / Development of a veterinary organogel formulation containing soy lecithin, Pluronic® F-127 and meloxicam for the treatment of acute and chronic pain in small animals

O organogel é formado por uma matriz tridimensional composta de filamentos que se auto-organizam em uma rede entrelaçada e que, por seu tipo de estrutura, pode ser utilizado com o objetivo de atuar como um implante que se forma in situ, sendo capaz de se comportar como uma forma farmacêutica de liberação prolongada. Esse trabalho tem, por tanto, o objetivo desse trabalho foi desenvolver, caracterizar, quantificar e traçar perfis de dissolução para formulações de organogel contendo meloxicam como principio ativo. O material está dividido em quatro capítulos, sendo apresentada inicialmente (I) revisão da literatura a respeito da lecitina de origem vegetal, com suas principais fontes de obtenção, como soja, girassol e colza, e também seu uso farmacêutico na obtenção de formulações como organogéis, microemulsões e lipossomas. Os demais capítulos abordam (II) desenvolvimento e otimização de uma formulação de organogel contendo lecitina de soja e Pluronic® F-127 como formadores da matriz tridimensional e meloxicam como principio ativo. (III) Desenvolvimento e validação de um método de quantificação do teor de meloxicam por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). (IV) Desenvolvimento de um método de dissolução para formulações de organogel, que fosse capaz de ser utilizado na caracterização do perfil de dissolução de diferentes formulações. Com os resultados obtidos, foi possível desenvolver formulações de organogel contendo lecitina de soja, Pluronic® F-127 e meloxicam, assim como um método analítico validado para as analises de teor. Por fim, foram obtidos também os perfis de dissolução de duas formulações mais promissoras

Organogels are formed by a three-dimensional matrix composed of filaments that selforganize in an interlaced network and that, due to its type of structure, can be used with the objective of acting as an implant that forms in situ, being able to behave as an extendedrelease dosage form. This work has, therefore, the objective of this work was to develop, characterize, quantify and trace dissolution profiles for organogel formulations containing meloxicam as active ingredient. The material is divided into four chapters, initially presented (I) review of the literature on lecithin of plant origin, with its main sources of production, such as soybean, sunflower and rapeseed, and also its pharmaceutical use in obtaining formulations such as organogels , microemulsions and liposomes. The remaining chapters address (II) development and optimization of an organogel formulation containing soy lecithin and Pluronic® F-127 as three-dimensional matrix formers and meloxicam as an active ingredient. (III) Development and validation of a method for quantification of meloxicam content by high performance liquid chromatography (HPLC). (IV) Development of a dissolution method for organogel formulations, capable of being used to characterize the dissolution profile of different formulations. With the results obtained, it was possible to develop organogel formulations containing soy lecithin, Pluronic® F-127 and meloxicam, as well as a validated analytical method for content analysis. Finally, the dissolution profiles of two more promising formulations were also obtained

Climate conditions associated with the occurrence of antimicrobial and macrocyclic lactone residues in bulk tank milk / Condições climáticas associadas à ocorrência de resíduos de antimicrobianos e lactonas macrocíclicas em amostras de leite de tanque

The present study aimed to identify the climate condition parameters that are associated with the occurrence of antimicrobial and macrocyclic lactone residues in bulk tank milk using a multivariate principal components analysis (PCA). A total of 132 raw milk samples were collected at dairy farms in Minas Gerais State in Brazil and analyzed for 35 analytes, comprising macrocyclic lactones and antibacterials, using liquid chromatography coupled with mass spectrometry in tandem mode spectrometry. Of the 132 samples, 34 (25.76%) bulk tank milk samples were positive for at least one analyte. PCA showed that antimicrobial residues in bulk tank milk occurred less frequently on days with a higher average temperature, maximum temperature and temperature-humidity index. In contrast, relative humidity was inversely associated with antimicrobial residues in raw milk. The PCA showed that daily milk production was also related to macrocyclic lactone residues, while rainfall showed an inverse association. Thus, some climate conditions, such as average temperature, maximum temperature and temperature-humidity index, can predict the moments with lower risk of occurrence of antimicrobial residues in bulk tank milk, in contrast to relative humidity. Furthermore, the risk of macrocyclic lactone residues in bulk tank milk was higher in months with less rainfall.(AU)

O presente trabalho objetivou identificar fatores climáticos associados à ocorrência de resíduos de antimicrobianos e lactonas macrocíclicas em amostras de leite de tanque por análise multivariada de componentes principais (ACP). Para o presente trabalho, 132 amostras de leite cru foram coletadas em fazendas leiteiras localizadas no estado de Minas Gerais (Brasil) e analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência e espectrometria de massas in tandem para detecção de 35 analitos, incluindo antimicrobianos e lactonas macrocíclicas. Das 132 amostras de leite analisadas, detectou-se pelo menos um analito em 34 (25,76%) amostras. A ACP demonstrou que a presença de resíduos de antimicrobianos no leite de tanque ocorreu menos frequentemente nos dias com maior temperatura média, temperatura máxima e índice de temperatura e umidade. Por outro lado, a umidade relativa foi inversamente associada à presença de resíduos antimicrobianos no leite. A ACP demonstrou associação entre a presença de resíduos de lactonas macrocíclicas no leite e a produção diária de leite, e a presença de resíduos de lactonas macrocíclicas ocorreu menos frequentemente nos meses com maiores índices pluviométricos. Dessa forma, conclui-se que alguns índices climáticos, como temperatura média, temperatura máxima e índice de temperatura e umidade, podem predizer períodos com maior risco de ocorrência de resíduos de antimicrobianos, em contraste com a umidade relativa. Além disso, o risco de resíduos de lactonas macrocíclicas no leite de tanque foi maior nos meses com menores índices pluviométricos.(AU)

Survey of pyrethroid, macrocyclic lactone and antibacterial residues in bulk milk tank from Minas Gerais State, Brazil / Resíduos de piretróides, lactonas macrocíclicas e antimicrobianos em amostras de leite de tanque no estado de Minas Gerais

A survey of veterinary drug residues in bulk milk tank from Minas Gerais State, Brazil, was carried out through a broad scope analysis. Here, 132 raw milk samples were collected at 45 dairy farms in Minas Gerais from August 2009 to February 2010, and analyzed for 42 analytes, comprising pyrethroids, macrocyclic lactones and antibacterials, using liquid chromatography coupled with mass spectrometry in tandem mode and gas chromatography with electron capture detection. Within all milk samples, at least one veterinary drug residue was identified in 40 milk samples (30.30%) by confirmatory tests, whereas 16 samples (12.12%) showed the presence of at least two residues. With regard to the Brazilian maximum residue levels, 11 milk samples (8.33%) were non-compliant according to Brazilian Legislation. The veterinary drugs detected in the non-compliant milk samples include penicillin V (one sample), abamectin (one sample) and cypermethrin (nine samples). Furthermore, the antibacterial screening methods failed to identify most of the positive samples that were detected by confirmatory tests, leading to a large discrepancy between the screening and confirmatory antimicrobial tests. Thus, the present study indicated that the veterinary drugs residues still represents a great concern for the milk production chain.(AU)

Avaliou-se a presença de 42 analitos, incluindo piretróides, lactonas macrocíclicas e antimicrobianos em 132 amostras de leite de tanque proveniente de 45 propriedades leiteiras localizadas no Estado de Minas Gerais. Para tal, utilizou-se a cromatografia líquida acoplada a espectrofotometria de massas tandem e cromatografia gasosa com detector com captura de elétrons. Dentre todas as amostras de leite, 40 (30,30%) amostras de leite de tanque apresentaram a presença de pelo menos um analito, enquanto 16 amostras (12,12%) de leite demonstraram a presença de pelo menos dois analitos. Considerando os limites estabelecidos pela legislação brasileira, 11 amostras de leite (8,33%) seriam consideradas como não conforme. Ademais, os testes de triagem para detecção de antimicrobianos no leite não conseguiram identificar a maioria das amostras positivas nos testes confirmatórios, levando a grande discrepância entre estes testes. Desta forma, os resultados do presente estudo indicam que os períodos de descarte do leite, especialmente para piretróides, não foram plenamente respeitados por todos os produtores de leite. Além disto, uma discrepância entre os resultados dos testes confirmatórios e os testes de triagem foi observada.(AU)

Buparvaquone nanostructured lipid carrier development: physicochemical and in vitro leishmanicidal performances / Desenvolvimento de carreadores lipídicos nanoestruturados contendo buparvaquona: caracterização físico-química e avaliação da atividade leishmanicida in vitro

Leishmaniases is a group of diseases caused by parasites of the genus Leishmania. The estimated number of deaths from visceral leishmaniases ranges from 20,000 to 50,000 annually. The most common treatment over the past 60 years has been pentavalent antimonials. Besides the doubtful effectiveness, they present several disadvantages such as the need for parenteral administration, large doses, long treatment, severe toxicity and parasite resistance. Buparvaquone (BPQ), a drug used for veterinary treatment of theileriosis, showed promising activity against Leishmania spp. However, due to its low aqueous solubility and bioavailability, it has failed in in vivo tests. The use of nanotechnologies has the potential to overcome these drawbacks due to the following advantages: increase in drug water-solubility, increase in therapeutic efficacy and treatment toxicity reduction. Therefore, the present work aimed the development, optimization, physical-chemical evaluation and in vitro performances of nanostructured lipid carriers (NLC) for BPQ encapsulation. The NLC preparation was performed by high pressure homogenization, and surface response and factorial design were applied to formulation optimization. In vitro dissolution profiles were evaluated in phosphate buffer pH 7.4 with tween 80 0.07% w/v or sodium dodecyl sulfate 1% w/v and simulated body fluid pH 7.4. Cytotoxicity was evaluated in mouse peritoneal macrophages and leishmanicidal activity in L. infantum amastigotes. Six optimized NCL were prepared and they showed solubility improvement from 1.5- fold to 611-fold when compared with free BPQ, depending on the formulation and medium. Dissolution profiles showed the NLC formulation suitability for BPQ regarding oral administration, the release could reach 83.29% of a 4mg dose in 30 minutes for formulation of 175.1 nm, while the free drug could be dissolved only 2.89% of the same dose after 4 hours. Moreover, formulation of 230.7 nm showed 81.42% of drug release in in phosphate buffer pH 7.4 with dodecyl sulfate 1.0% w/v after 30 minutes, while BPQ did not dissolved. Cytotoxicity assay showed the safety of all formulations. The iv CC50 values were close to 500 µM, while the IC50 against amastigotes was only 456.5 nM for free BPQ. Developed NLCs showed an increase in IC50 from 2.0 to 3.1-fold when compared to free drug in the in vitro leishmanicidal evaluation. Therefore, the NLC containing BPQ are a promising alternative for the treatment of leishmaniases as oral and parenteral drug dosage forms. Additionally, they have a potential use for lymphatic targeted drug delivery, which can be an innovative approach for this neglected disease.

Leishmanioses são um grupo de doenças causadas por parasitas do gênero Leishmania. O número estimado de óbitos por leishmaniose visceral varia entre 20.000 e 50.000 por ano. O tratamento mais comum nos últimos 60 anos tem sido os antimônios pentavalentes. Além da eficácia duvidosa, eles apresentam várias desvantagens, como a necessidade de administração parenteral, altas doses, tratamento prolongado, toxicidade severa e resistência parasitária. Buparvaquona (BPQ), um fármaco usado para tratamento veterinário da teileriose, mostrou atividade promissora contra Leishmania donovani. No entanto, devido à sua baixa solubilidade e biodisponibilidade aquosa, falhou em testes in vivo. O uso das nanotecnologias tem o potencial de superar esses obstáculos devido às seguintes vantagens: aumento da solubilidade em água, aumento da eficácia terapêutica e redução da toxicidade do tratamento. Portanto, o presente trabalho objetivou o desenvolvimento, otimização, avaliação físico-química e avaliação do desempenho in vitro de carreadores lipídicos nanoestruturados (NLC) para o encapsulação da BPQ. A preparação do NLC foi realizada por homogeneização de alta pressão e superfície de resposta e planejamento fatorial foram aplicados à otimização das formulações. Os perfis de dissolução in vitro foram avaliados em tampão fosfato pH 7.4 com tween 80 a 0.07% p/v ou dodecilsulfato de sódio 1.0% p/v e fluido corporal simulado pH 7.4. A citotoxicidade foi avaliada em macrófagos peritoneais de camundongos e atividade leishmanicida em amastigotas de L. infantum. Foram preparados quatro NCL otimizados e mostraram melhora da solubilidade de 1,5 a 611 vezes quando comparado com a BPQ livre, dependendo da formulação e do meio. Os perfis de dissolução mostraram a adequação da formulação NLC para BPQ em relação à administração oral. A dissolução pode atingir 83,29% de uma dose de 4.0 mg em 30 minutos para a formulação de 175,1 nm, enquanto o fármaco livre dissolveu apenas vi 2,89% da mesma dose após 4 horas. Além disso, a formulação de 230,7 nm mostrou 81,42% de liberação do fármaco em tampão fosfato pH 7.4 com dodecil sulfato de sódio 1.0% p/v após 30 minutos, enquanto o BPQ não se dissolveu. O teste de citotoxicidade mostrou a segurança de todas as formulações. Os valores CC50 foram próximos de 500 µM, enquanto o IC50 em amastigotas foi de apenas 456,5 nM para BPQ livre. Os NLC desenvolvidos mostraram um aumento no IC50 de 2,0 a 3,1 vezes quando comparado ao;fármaco livre na avaliação leishmanicida in vitro. Logo, as NLC contendo BPQ são uma alternativa promissora para o tratamento de leishmanioses como formas farmacêuticas oral e parenteral. Além disso, eles têm um uso potencial para a sítio-específico ao sistema linfático, o que pode ser uma abordagem inovadora para esta doença negligenciada.

Residuos de fármacos en alimentos de origen animal: panorama actual en Colombia / Resíduos de fármacos nos alimentos de origem animal: panorama atual na Colômbia / Drugs residues in foods of animal origin: actual prospect in Colombia

De acuerdo con los organismos mundiales de referencia, los residuos de fármacos en alimentos de origen animal son considerados como un factor de riesgo en la salud pública y como limitante en el desarrollo económico de cualquier país. Estas razones junto con el avance de metodologías analíticas cada vez más sensibles, han hecho que los requisitos de sanidad e inocuidad exigidos en los alimentos sean cada vez más estrictos, especialmente cuando el destino de los productos es la exportación. Colombia, en su continua intención por aumentar las ventas de sus productos en el exterior, se ha visto en la necesidad de reformar normas existentes, generar nuevas reglamentaciones, y renovar su capacidad tecnológica, con el fin de controlar los residuos de fármacos en alimentos de origen pecuario y de esta forma cumplir con las exigencias demandadas por los países con los que desea negociar. La presente revisión, expone aspectos importantes relacionados con esta clase de residuos: su regulación nacional e internacional, los principales efectos potenciales que tienen sobre la salud humana, la evaluación del riesgo, los métodos más comunes con los cuales pueden ser detectados y el estado actual de la investigación y el control de estos residuos en Colombia.

According to worldwide reference organizations, drugs residues in animal products are risk factors in public health and economic limit on any country. Besides, quality requirements demanded in exported food are higher with development of more sensible analytical methods. Promotion of native products to international markets is fundamental in Colombian policies; in deed it has been necessary reforming procedures, generating new regulations, and renewing technological capacity to control drug residues in food of animal origin in order to fulfill requirements demanded from interested countries. This review exposes several aspects related to drug residues on animal tissues: national and international regulations, effects on human health, analytical methods for detect them, risk assessment, control and current research in Colombia.

De acordo com os órgãos mundiais de referência, os resíduos de fármacos nos alimentos de origem animal são considerados como um fator de risco na saúde publica como limitante no desenvolvimento econômico de quaisquer pais. Estas razões junto com avanço das metodologias analíticas, tem feito que as exigências a sanidade e na inocuidade dos alimentos sejam mais severas, especialmente quando o destino dos produtos é a exportação. Colômbia, na sua procura por aumentar suas vendas no exterior, tem visto a necessidade de mudar as normas existentes, gerar novas regras e renovar sua tecnologia, com o propósito de controlar os resíduos de fármacos nos alimentos de origem animal e assim preencher com as exigências dos países consumidores dos seus produtos. Esta revisão apresenta aspectos relacionados com este tipo de resíduos: sua normatividade nacional e internacional, os efeitos potenciais que eles têm sobre a saúde humana, a avaliação do risco, os métodos mais freqüentes com que podem ser determinados e o estado atual das pesquisas no controle destes resíduos na Colômbia.

Medicamentos veterinários na apicultura: metodologias analíticas para determinação de resíduos no mel / Veterinary drugs on the apiculture: analytical methodologies for residues determination

There is an increasing demand for the determination of veterinary drug residues in honey. To determine these residues, many analytical techniques are available, but the high performance liquid chromatography has an important position, since it can be connected to different detectors in order to reach the required selectivity for the contaminant identification and quantification. Nowadays, mass spectrometry has become one of the most appropriated techniques to determinate veterinary drug residues in foods. However, the sample preparation is still a critical step in this kind of analysis. The present work is a review of the analytical methods that use high performance liquid chromatography for the determination of veterinary drug residues in honey, with emphasis on mass spectrometry and sample preparation.

Há uma demanda crescente para a determinação dos resíduos de medicamentos veterinários em mel. Para realizar essa determinação, diversas técnicas analíticas estão descritas. A cromatografia líquida de alta eficiência destaca- se entre as técnicas atualmente utilizadas devido a sua capacidade de separação e à possibilidade de acoplamento do cromatógrafo com diversos tipos de detectores a fim de obter a seletividade necessária para identificação e quantificação do(s) resíduo(s). Atualmente, a espectrometria de massas tem se mostrado a técnica de análise mais adequada para a identificação e quantificação de resíduos de medicamentos veterinários em alimentos. Entretanto, o preparo da amostra para análise é, ainda, a etapa crítica neste tipo de determinação. O presente trabalho faz uma revisão dos métodos anaíÌticos que utilizam acromatografia líquida de alta eficiência na determinação de resíduos de medicamentos veterinários em mel, com ênfase na utilização da espectrometria de massas e no preparo de amostra.

Validation of ELISA test kits for detection of beta-agonist residues in meat.

Three ELISA test kits, the Randox ELISA beta-agonist test kit, Euro-Diagnostica test kit, and Ridascreen beta-agonist test kit, were evaluated for screening of meat and liver for beta-agonist residues in fortified and field-incurred samples. It was found that the Randox beta-agonist test kit was more suitable as a screening tool due to its accuracy, ease of use, and lower cost. The tests were able to detect beta-agonist residues at the minimum level of detection, as claimed by the suppliers. The performance of the method as assessed through recovery rates of beta-agonists in fortified samples was satisfactory with a low coefficient of variation (1-3%). Repeatability, as measured through the coefficient of correlation was also satisfactory. For field-incurred positive samples, the test kit showed a sensitivity of 100% and a low rate of false positives for goat and cow tissues. However, a high rate of apparent false positives was obtained for tissues of swine.

Simultaneous determination of sulphaquinoxaline and amprolium in veterinary mixture by HPLC and first derivative ultraviolet spectrophotometry

Two simple and reliable methods are described for the determination of sulphaquinoxaline [SQX] and amprolium [AMP] combined in veterinary powder. The first method depends on high performance liquid chromatography on a reversed phase column [micro. Bondapak-C[18]] using mobile phase consisting of acetonitrile-methanol-water-phosphoric acid [30: 5: 55: 0.7, by volumes] at a flow rate of 1 ml min[-1] with UV detection at 254 nm. The detection limits were 0.2 micro,g ml[1] and 0.35 micro g ml' and linearity ranges were 2-20].micro g ml and 4-40[.micro g ml for SQX and AMP, respectively. The second one deals with the first derivative ['D] spectrophotometry with zero-crossing measurment at 253 nm and 226 nm for SQX and AMP respectively. The detection limits were 0.3 micro.g ml and 1.2 micro g ml[1] and linearity ranges were 1 -18 micro,g ml1 and 4-32 micro.g ml1 for SQX and AMP, respectively, the proposed procedures were successfully applied to the determination of these drugs in laboratory prepared mixtures with mean percentage recovery ranged from 98.50 to 99.75 and in commercial preparation ranged from 103.85 to 104.85